原代細胞收貨注意事項：
貼壁細胞經(jīng)過快遞運輸顛簸會出現(xiàn)漂浮脫落等情況： 收到先放培養(yǎng)箱靜置穩(wěn)定。如有脫落需收集處理，處理細節(jié)請查閱以下信息，原瓶內(nèi)為完全培養(yǎng)基，可以收集使用。
收到細胞后請把細胞圖片狀態(tài)發(fā)我們， 根據(jù)圖片可以給出接下來的處理建議（傳代或者換液），首次建議一比二傳代至2個T25。
貼壁細胞傳代步驟：
準(zhǔn)備工作：胰酶和完全培養(yǎng)基（需要提前37度復(fù)溫）、PBS（常溫）避免細胞遇冷受刺激
（1） 吸出原培養(yǎng)液
（2） 加入2ml左右PBS，輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞，吸出PBS丟棄
（3） 加入1ml左右0.25%含EDTA的胰酶，輕輕晃動培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細胞。
（4） 根據(jù)不同的細胞放入培養(yǎng)箱時及時關(guān)注消化時間，消化約2-3min，顯微鏡下看到細胞中間的細胞明顯分離變圓細胞間隙變大，顯微鏡下看細胞呈單個游離狀態(tài)，側(cè)立培養(yǎng)瓶細胞可以滑落時可終止消化，可以輕拍培養(yǎng)瓶側(cè)身。（消化時主要看消化狀態(tài)，如果沒有變圓，側(cè)立時不能滑落時，可以適當(dāng)延長消化時間，每30s觀察一次細胞）
（5） 加入3ml含10%血清的培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹打細胞使之脫壁并在液體里反復(fù)輕輕吹打（不要太用力）使細胞盡量呈單顆細胞的懸浮液。
（6） 收集細胞懸液離心，1000rpm/min（約250g） 5分鐘，離心完吸出上清丟棄。
（7） 加入新鮮完全培養(yǎng)基，吹打幾下混勻細胞即可，按需接種到新培養(yǎng)瓶，補足完全培養(yǎng)基，擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進行培養(yǎng)。
（8） 檢查培養(yǎng)箱二氧化碳，溫度和水盤。
貼壁細胞傳代的方法，特別注意的是第4步消化過程，消化至到細胞完全變圓以后側(cè)立培養(yǎng)瓶細胞可以出現(xiàn)滑落時再終止消化。消化到這樣的一個狀態(tài)，后續(xù)輕輕稍微吹一下即可很好的分散細胞。
后續(xù)處理建議：傳代后2-3天換液一次即可，（如細胞第二天全部貼壁培養(yǎng)基顏色變黃，可以換液，）無需每天換液（換液太勤可能會損失細胞影響細胞狀態(tài)）換液時候如果沒有特殊情況也可以不用PBS清洗。
原代懸浮細胞接收注意事項:
1. 懸浮細胞經(jīng)過快遞運輸，會出現(xiàn)細胞皺縮和死細胞碎片等情況，收到時先放培養(yǎng)箱靜置4小時以上，2.將瓶內(nèi)全部培養(yǎng)基吸至離心管內(nèi)離心收集，3.使用5-6ml新鮮培養(yǎng)基重懸細胞沉淀后接種T25培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。
懸浮細胞傳代：
如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。 方法一：將細胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補加新鮮培養(yǎng)液后重懸混勻按1：2的比例分到 新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力。 方法二：1) 半換液處理，豎著培養(yǎng)瓶靜置 10-20min 左右，肉眼可見大部分細胞沉在底部； 2) 輕輕吸掉 3ml 左右培養(yǎng)基，將剩余細胞懸起混勻； 3) 將細胞懸液按 1:2 到 1:3 的比例分到新的含 6-8 mL 完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中或者培養(yǎng)瓶中，一般這樣傳代 3 次左右可以離心傳代一次。 注意：使用試劑需要提前37度復(fù)溫，避免細胞遇冷受刺激皺縮。
后續(xù)處理建議：懸浮細胞狀態(tài)在無碎片無黑點的情況下無需換液，觀察培養(yǎng)基偏黃及時進行補液2ml左右，當(dāng)細胞出現(xiàn)分泌物可以使用半換液法處理，參考圖片
離心管方式收貨：收到離心管酒精消毒放入培養(yǎng)穩(wěn)定2-4H后進行1000rpm離心5min。去除上清后保留細胞沉淀用新鮮培養(yǎng)基重懸混勻轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶進行培養(yǎng)，次日觀察細胞的狀態(tài)及密度.
